上海siRNA轉(zhuǎn)染試劑

目前核酸遞送系統(tǒng)的局限性之一是無法深入穿透組織和***，如實體瘤和大腦。通常情況下，只能到達并轉(zhuǎn)染細胞的外層，從而導(dǎo)致***效果不佳。愛潑斯坦巴爾病毒(EBV)，一種人類**病原體，似乎通過劫持**微環(huán)境中的外泌體進行細胞間通訊來克服這一點。外泌體是小的膜囊泡(40 ~ 200nm)，起源于內(nèi)吞。在被釋放到細胞外環(huán)境后，由于其表面存在細胞識別分子，它們可以與鄰近細胞融合。外泌體外泌體是細胞間mRNA、小rna (miRNA)和信號因子的載體，通過經(jīng)歷細胞內(nèi)化和釋放的幾個周期，能夠跨越幾層組織。它們可以由多種細胞分泌，包括腫瘤細胞、樹突狀細胞、B細胞、T細胞、上皮細胞和神經(jīng)元。利用外泌體途徑的一種潛在方法是將脂質(zhì)體核酸重新包裝到外泌體中。這可以通過靶向外泌體特異性的膜蛋白(如四跨蛋白和膜聯(lián)蛋白)并啟動脂質(zhì)體和外泌體之間的融合事件來實現(xiàn)。在轉(zhuǎn)染實驗中使用對照對于確定所使用的轉(zhuǎn)染試劑和核酸的效果和效率至關(guān)重要。上海siRNA轉(zhuǎn)染試劑

轉(zhuǎn)染時通常推薦使用血清減少或無血清培養(yǎng)基，包括陽離子轉(zhuǎn)染試劑，如Lipofectamine、HiperFect 和EndofectinMax。這種轉(zhuǎn)染活動需要形成陽離子脂質(zhì)體-DNA復(fù)合物，這需要帶正電的脂質(zhì)體分子和帶負電的核酸之間的相互作用。因此，血清中負電荷分子的存在可能會影響這種復(fù)雜的相互作用，從而影響轉(zhuǎn)染效率。然而，發(fā)現(xiàn)10%血清的存在導(dǎo)致FuGENE HD、jetPEI、Lipofectamine 2000和Arrest-In轉(zhuǎn)染MCF-7、HeLa、C2C12和MC3T3的轉(zhuǎn)染效率更高。研究表明，轉(zhuǎn)染中少量的血清可以通過調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)染復(fù)合物的zeta電位來改善轉(zhuǎn)染復(fù)合物與其宿主細胞表面之間的表面相互作用。河北小鼠轉(zhuǎn)染試劑在選擇合適的小RNA分子進行轉(zhuǎn)染相關(guān)功能分析之前，應(yīng)先確定其實驗需要。

在選擇合適的小RNA分子進行轉(zhuǎn)染相關(guān)功能分析之前，應(yīng)先確定其實驗需要。例如，siRNA*對一個靶標(biāo)具有高度特異性，而miRNA具有調(diào)節(jié)多個下游靶標(biāo)的潛力。如今，可以人工合成各種類型的短長度寡核苷酸來模仿小RNA分子，以研究這些小RNA分子的敲入/敲入/敲出效應(yīng)。常用的寡核苷酸可分為模擬物或拮抗劑。模擬物是一種基于rna的小寡核苷酸(可能是piRNA、miRNA或siRNA)，其結(jié)構(gòu)使其能夠與目標(biāo)mRNA結(jié)合以抑制其功能，從而導(dǎo)致特定基因的翻譯抑制。相反，拮抗劑是一種寡核苷酸，它將與互補的小RNA鏈(如miRNA)結(jié)合以拮抗其活性，從而增加目標(biāo)基因的表達。

選擇合適的轉(zhuǎn)染試劑可能取決于幾個因素，包括轉(zhuǎn)染核酸的類型和轉(zhuǎn)染的復(fù)雜性(單轉(zhuǎn)染或共轉(zhuǎn)染)。一些試劑如Effectene和TransIT-X2是專門用于質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)染的，而一些試劑如Lipofectamine RNAiMAX更適合于小寡核苷酸的轉(zhuǎn)染。哺乳動物原代細胞由于其有限的壽命和有限的擴增能力，通常比其他細胞類型更不容易受到轉(zhuǎn)染。非脂質(zhì)體試劑在轉(zhuǎn)染人原代細胞方面優(yōu)于脂質(zhì)體試劑，包括PEC、HASMC和HAEC、人原代成肌細胞和AGS。相比之下，據(jù)報道，基于脂質(zhì)體的試劑(如Lipofectamine和DharmaFECT家族)在轉(zhuǎn)染其他原代人細胞(如原代臍帶靜脈內(nèi)皮細胞(HUVEC)和BM-MSC方面比非脂質(zhì)體試劑產(chǎn)生更高的轉(zhuǎn)染效率。轉(zhuǎn)染試劑的凍融被認為是另一個可能影響轉(zhuǎn)染效率的潛在因素。

不同種類的納米顆粒轉(zhuǎn)染細胞系后，產(chǎn)生不同的效率、毒性和組織特異性。這些大量的測試表明，納米顆粒作為載體的效率與普通的非病毒轉(zhuǎn)染方法相當(dāng)。Tabatt等人所做的研究比較了使用脂質(zhì)體、陽離子固體li-pid納米顆粒和兩種商用轉(zhuǎn)染劑對COS-1細胞系(非洲綠猴腎成纖維細胞樣細胞)使用四種不同的轉(zhuǎn)染介質(zhì)所取得的轉(zhuǎn)染效果。固體脂質(zhì)na-noparticles轉(zhuǎn)染組和溶酶體(均由DOTAP -N -(1-(2,3-二聚乙氧基)丙基)-N,N,N-三甲基硫酸銨)轉(zhuǎn)染組的熒光素酶基因表達效率沒有統(tǒng)計學(xué)上的***差異，在每種轉(zhuǎn)染介質(zhì)中保持相同水平。然而，獲得的轉(zhuǎn)染效率低于使用商業(yè)轉(zhuǎn)染劑EscortTM 的效率，該轉(zhuǎn)染劑由DOPE(1,2-二-(順式-9-十八烷基)- n-甘油-3-磷酸乙醇胺)組成。研究人員通過在HepG2細胞(人肝細胞肝*細胞系)上使用固體脂質(zhì)納米顆粒，實現(xiàn)了與市買的lipo-fectamine相同的綠色熒光蛋白和熒光素酶蛋白表達水平。轉(zhuǎn)染是將外源核酸送入細胞的過程，其目的是使外源基因編碼的蛋白能夠在細胞中表達。陜西重慶轉(zhuǎn)染試劑

評估轉(zhuǎn)染效率至關(guān)重要，特別是在需要高轉(zhuǎn)染效率以保證特定下游靶標(biāo)轉(zhuǎn)錄后調(diào)控的功能研究中。上海siRNA轉(zhuǎn)染試劑

在腺病毒載體或脂質(zhì)體的全身遞送后，轉(zhuǎn)基因表達相對短暫。靜脈注射脂叢的肺表達比給藥后第1天和第2天觀察到的比較大表達量每周減少約1log。造成這種現(xiàn)象的機制可能有以下幾種:(a)產(chǎn)生針對外源基因產(chǎn)物的新***抗體，(b)細胞因子介導(dǎo)的啟動子關(guān)閉，(c)通過凋亡、先天或適應(yīng)性免疫反應(yīng)根除表達細胞以及（d）表達基因的細胞因細胞凋亡而減少是導(dǎo)致表達減少。這些機制具有重要意義，因為不可能重復(fù)給藥，而且轉(zhuǎn)基因凈表達會隨著時間的推移而減少。盡管通過中和或消除細胞因子的產(chǎn)生可以提高肺中的基因表達水平。靜脈給藥引起的毒性可能是由于小鼠轉(zhuǎn)氨酶水平的增加，在相同劑量下，小鼠肝臟出現(xiàn)組織病理學(xué)病變，但肺部沒有不良反應(yīng)。這種增加可以通過使用較少的細胞毒性陽離子脂質(zhì)體（CLs）來控制。轉(zhuǎn)氨酶的釋放歸因于未甲基化的堿基，如pDNA序列中的胞嘧啶和鳥嘌呤。上海siRNA轉(zhuǎn)染試劑