難轉(zhuǎn)細胞轉(zhuǎn)染試劑定制

在一項將質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)染到HUVEC中的研究中，使用包括Effectene和FuGENE 6在內(nèi)的非脂質(zhì)體試劑比脂質(zhì)體試劑DOTAP(18%)產(chǎn)生了更好的轉(zhuǎn)染效率(34%和33%)。在另一項用質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)染HUVEC的研究中，與Effectene和FuGENE 6或HD等非脂質(zhì)體試劑(48小時時均<20%)相比，脂質(zhì)體試劑顯示出更高的轉(zhuǎn)染效率(Lipofectamine LTX在48小時時約為38%，Lipofectamine 2000在48小時時約為23%)。在這些研究中，基于脂質(zhì)體和非脂質(zhì)體的試劑轉(zhuǎn)染HUVECs的效率無法得出結(jié)論，主要是由于所用試劑的范圍存在差異。然而，一致的觀察結(jié)果表明轉(zhuǎn)染效率仍然存在無論使用何種試劑，低于40%無疑暗示原代細胞是一種難以轉(zhuǎn)染的細胞類型。基因注射包括通過注射將所需的核酸物質(zhì)直接輸送到宿主細胞核中。難轉(zhuǎn)細胞轉(zhuǎn)染試劑定制

共轉(zhuǎn)染是將一種以上類型的核酸引入真核細胞的過程。組合的一些例子包括多個質(zhì)粒DNA ,siRNA和質(zhì)粒DNA ，以及多個miRNAs進入同一個細胞。通常，多質(zhì)粒DNA共轉(zhuǎn)染的目的是將一種以上的外源基因?qū)胨拗骷毎?。其?yīng)用之一是生產(chǎn)由幾種質(zhì)粒DNA成分組成的合成病毒或雜交載體。一個例子是在HEK293細胞系中，用轉(zhuǎn)移、包膜和包裝載體等幾種質(zhì)粒載體生成慢病毒。此外，多個質(zhì)粒DNA的共轉(zhuǎn)染也可以應(yīng)用于蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用(PPI)研究，以研究一種蛋白質(zhì)與另一種蛋白質(zhì)之間的關(guān)系。遼寧fugene轉(zhuǎn)染試劑在選擇合適的小RNA分子進行轉(zhuǎn)染相關(guān)功能分析之前，應(yīng)先確定其實驗需要。

RNA和信使RNA與DNA轉(zhuǎn)染類似，RNA可以通過基于RNA的病毒或非病毒載體導(dǎo)入真核細胞。與涉及DNA的轉(zhuǎn)染相比，RNA轉(zhuǎn)染可能產(chǎn)生更高的轉(zhuǎn)染效率，因為后者不需要穿越核膜。在不需要基因組整合、轉(zhuǎn)錄和轉(zhuǎn)錄后處理的情況下，RNA轉(zhuǎn)染也可能加速所需蛋白質(zhì)的產(chǎn)生。使用基于信使RNA(mRNA)的載體也可以防止因整合到宿主基因組而引起的并發(fā)癥，從而允許表達特定的，所需的蛋白質(zhì)。然而，RNA轉(zhuǎn)染后，蛋白質(zhì)表達是短暫的，與DNA相比，RNA的穩(wěn)定性相對較差，因此在細胞內(nèi)運輸時更容易降解。小RNA是長度為18-200個堿基對(bp)的RNA分子，具有調(diào)控轉(zhuǎn)錄后基因調(diào)控和RNA修飾的能力。小RNA包括microRNAs(miRNAs)、小干擾RNA(siRNA)、短發(fā)夾RNA（shRNA）等。microRNAs和piRNAs都是內(nèi)源性單鏈小RNA。miRNAs(18-25bp)通過抑制目標mRNA或干擾其翻譯起始，參與下游mRNA的轉(zhuǎn)錄后調(diào)控。與miRNAs和piRNAs類似，siRNA也在調(diào)控轉(zhuǎn)錄后基因表達中發(fā)揮作用。siRNA的長度通常為20-24bp，可表達為內(nèi)源性或外源性雙鏈小RNA。shRNA是一種具有發(fā)夾環(huán)的內(nèi)源性雙鏈小RNA。shRNA可以結(jié)合mRNA上的互補序列來降解它。

目前核酸遞送系統(tǒng)的局限性之一是無法深入穿透組織和***，如實體瘤和大腦。通常情況下，只能到達并轉(zhuǎn)染細胞的外層，從而導(dǎo)致***效果不佳。愛潑斯坦巴爾病毒(EBV)，一種人類**病原體，似乎通過劫持**微環(huán)境中的外泌體進行細胞間通訊來克服這一點。外泌體是小的膜囊泡(40 ~ 200nm)，起源于內(nèi)吞。在被釋放到細胞外環(huán)境后，由于其表面存在細胞識別分子，它們可以與鄰近細胞融合。外泌體外泌體是細胞間mRNA、小rna (miRNA)和信號因子的載體，通過經(jīng)歷細胞內(nèi)化和釋放的幾個周期，能夠跨越幾層組織。它們可以由多種細胞分泌，包括腫瘤細胞、樹突狀細胞、B細胞、T細胞、上皮細胞和神經(jīng)元。利用外泌體途徑的一種潛在方法是將脂質(zhì)體核酸重新包裝到外泌體中。這可以通過靶向外泌體特異性的膜蛋白(如四跨蛋白和膜聯(lián)蛋白)并啟動脂質(zhì)體和外泌體之間的融合事件來實現(xiàn)。選擇合適的轉(zhuǎn)染試劑可能取決于幾個因素，包括轉(zhuǎn)染核酸的類型和轉(zhuǎn)染的復(fù)雜性(單轉(zhuǎn)染或共轉(zhuǎn)染)。

超聲輔助轉(zhuǎn)染涉及在宿主細胞膜上制造微小的孔，以促進核酸(包括DNA和RNA)的傳遞。與前一種策略類似，超聲照射的暴露時間、脈沖數(shù)和密度也被報道與轉(zhuǎn)染效率成比例相關(guān)，直至達到閾值。超過耐受極限，細胞存活率和轉(zhuǎn)染效率可能會下降。同樣，增加核酸的數(shù)量也可以提高超聲輔助轉(zhuǎn)染的轉(zhuǎn)染效率。在同一項研究中，超聲轉(zhuǎn)染懸浮培養(yǎng)的人293T細胞比轉(zhuǎn)染貼壁培養(yǎng)的相同細胞類型更容易。然而，這一觀察結(jié)果與另一項研究的結(jié)果不一致，該研究報告在懸浮或單層條件下培養(yǎng)的轉(zhuǎn)染大鼠細胞數(shù)量沒有***差異。值得注意的是，后一項研究還報道了單層培養(yǎng)的大鼠細胞在轉(zhuǎn)染后保持較高的細胞活力。然而，這兩項研究的不一致結(jié)果表明，超聲穿孔的比較好培養(yǎng)條件可能因使用的細胞系不同而異。在另一項研究中表明超聲轉(zhuǎn)染效率因使用的細胞類型而異，Hela和T-24細胞系的超聲轉(zhuǎn)染效率優(yōu)于PC-3、U937和Meth A細胞系。因此，細胞類型的選擇是影響超聲轉(zhuǎn)染效率的另一個因素。用二乙基氨基乙基修飾，右旋糖酐鏈的酰胺化很容易被質(zhì)子化，這使得它可以自組裝成帶負電荷核酸的納米顆粒。肝臟轉(zhuǎn)染試劑優(yōu)惠

利用外泌體途徑的一種潛在方法是將脂質(zhì)體核酸重新包裝到外泌體中。難轉(zhuǎn)細胞轉(zhuǎn)染試劑定制

納米顆粒的主要特性使它們能夠用于細胞轉(zhuǎn)染，但似乎找到一種既能改善基因表達又不影響細胞、不對細胞造成損害的比較好技術(shù)也至關(guān)重要。納米顆粒參與內(nèi)皮運輸?shù)哪芰κ蛊淠軌蚓脑O(shè)計**精確的方法，將基因結(jié)構(gòu)靶向到特定的作用位置。來自不同化合物和元素的納米顆粒的作用方式與轉(zhuǎn)染的非病毒載體相同，這使它們能夠通過內(nèi)吞作用將DNA運輸過細胞膜。DNA被包裹起來，很容易從核內(nèi)體中釋放出來，也被核酸酶保護著不被消化。由于有許多不同種類的納米顆粒，找到**適合轉(zhuǎn)染哺乳動物細胞的納米顆粒是至關(guān)重要的。將納米顆粒與其他化合物連接成多功能、復(fù)雜的運輸單元，可以提高穿越細胞膜和細胞內(nèi)運輸?shù)男省⒌鞍踪|(zhì)或多肽結(jié)合到納米顆粒上，根據(jù)細胞類型的不同，轉(zhuǎn)染效率提高了5到10倍。難轉(zhuǎn)細胞轉(zhuǎn)染試劑定制