本課題在體外分離、培養(yǎng)和鑒定人牙髓干細(xì)胞、牙周膜干細(xì)胞及根尖牙rutou干細(xì)胞的基礎(chǔ)上,通過比較體內(nèi)、外不同培養(yǎng)模式下,血小板裂解液對這三種牙源性干細(xì)胞增殖及分化的影響,以期找到PL應(yīng)用于牙源性干細(xì)胞培養(yǎng)、誘導(dǎo)分化的較好方式,為研究相關(guān)機(jī)制及組織工程應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ),同時(shí)為將來PL在臨床zhiliao方面的應(yīng)用提供新的思路。結(jié)果如下。1.牙髓干細(xì)胞、根尖牙rutou干細(xì)胞和牙周膜干細(xì)胞的分離、培養(yǎng)和鑒定使用酶消化法或組織塊法分離獲得人原代DPSCs、SCAP和PDLSCs,利用有限稀釋法克隆化培養(yǎng)以純化傳代細(xì)胞;采用免疫細(xì)胞染色及流式細(xì)胞儀鑒定細(xì)胞STRO-1等表型,確定所獲細(xì)胞的間充質(zhì)干細(xì)胞屬性。采用成脂誘導(dǎo)及成骨/成牙本質(zhì)誘導(dǎo)驗(yàn)證細(xì)胞的多向分化能力。2.血小板裂解液的制備及相關(guān)培養(yǎng)體系的建立使用10人份機(jī)**小板,混合后利用凍融裂解法制得滿足實(shí)驗(yàn)需要的血小板裂解液PL;將PL制成品以一定的體積濃度比加入普通培養(yǎng)基及礦化誘導(dǎo)培養(yǎng)基配制成條件培養(yǎng)液;將擴(kuò)增培養(yǎng)所獲的牙源性干細(xì)胞以平面培養(yǎng)或復(fù)合HA-TCP支架培養(yǎng),營造不同的細(xì)胞培養(yǎng)空間環(huán)境。
人源血小板裂解物的細(xì)胞增殖速度,明顯大于添加胎牛血清或添加AB血清的實(shí)驗(yàn)組。進(jìn)口血小板裂解液價(jià)格多少
本研究中使用的HPL是Stemulate公司兩款人源血小板裂解液(NH和H)是在工業(yè)規(guī)模(很小批量為20L)生產(chǎn)的,具備高度的批間一致性。將脂肪來源的間充質(zhì)干細(xì)胞在DME/F-12中添加10%Stemulate-NH或10%FBS進(jìn)行傳代培養(yǎng)11代。在DME/F-12中分別添加5、7.5或10%Stemulate-NH,并與10%胎牛血清進(jìn)行比較。羊膜來源間充質(zhì)干細(xì)胞也在2.5或5%Stemulate中培養(yǎng),與10%胎牛血清相比。牙髓來源的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞在DME/F-12中添加不同濃度的Stemulate-NH或Stemulate-H,并與添加10%FBS的培養(yǎng)基進(jìn)行比較。在所有實(shí)驗(yàn)中,每天都監(jiān)測細(xì)胞,每次傳代結(jié)束時(shí),收獲細(xì)胞,并使用臺盼藍(lán)和一個(gè)自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)器計(jì)數(shù)然后繼續(xù)傳代。Merck血小板裂解液常見問題血小板裂解液使用的時(shí)候有什么注意事項(xiàng)?
MSCs是異質(zhì)性的細(xì)胞群,其組成可能受培養(yǎng)條件的影響。血小板裂解液中肝素及其濃度高低對細(xì)胞形態(tài)和生長模式并未有明顯的影響。通過免疫熒光顯微鏡分析未發(fā)現(xiàn)波形蛋白(一種通常在中胚層起源的細(xì)胞中表達(dá)的中間絲)和α-SMA表達(dá)的差異,肝素濃度對于α-SMA(綠色)和波形蛋白(紅色)的分布并無影響。脂肪組織源性間充質(zhì)干細(xì)胞(AT-MSC)和骨髓源性間充質(zhì)干細(xì)胞(BM-MSC)本身免疫表型就是相似的,經(jīng)添加不同濃度肝素的血小板裂解液培養(yǎng)擴(kuò)增的AT-MSC和BM-MSC的流式細(xì)胞分析結(jié)果顯示出CD29、CD73、CD90和CD105表達(dá),而表面標(biāo)記CD14、CD31、CD34和CD45的缺失,可見肝素濃度對MSC免疫表型的表達(dá)水平幾乎是沒有影響的。
產(chǎn)品制造:nLivenPR由Sexton Biotechnologies制造,其質(zhì)量體系經(jīng)認(rèn)證為符合ISO9001標(biāo)準(zhǔn);制造過程根據(jù)制造商的要求進(jìn)行控制質(zhì)量體系。處理包括匯集大約100個(gè)供體來源的血小板單位,以破裂血小板膜,用0.5μm和0.2μm過濾器過濾,經(jīng)過一系列的輻照和無菌填充流程。通過一系列的產(chǎn)品放行測試保持批次間的一致性;分析證書是有效的隨每批提供,以表明其符合所有放行標(biāo)準(zhǔn)。Sexton Biotechnologies申明生產(chǎn)nLivenPR所用的原材料成分均非人類動(dòng)物起源。血小板裂解液和胎牛血清,各自有利弊,只是這些年大家對血小板裂解物的熱情比較高漲。
在解凍的ELAREM Prime血小板裂解液中可能會形成不溶性顆粒。顆粒形成不會影響細(xì)胞培養(yǎng)性能。如果完全細(xì)胞培養(yǎng)基中出現(xiàn)凝結(jié)或不溶性顆粒,建議在ELAREM Prime血小板裂解液在基礎(chǔ)培養(yǎng)基中稀釋后使用0.22μm過濾器過濾完全培養(yǎng)基。過濾不會影響細(xì)胞生長性能(經(jīng)過MSC測試)。但是,不建議對100%濃縮的ELAREM Prime血小板裂解液進(jìn)行過濾。避免多次凍融循環(huán)ELAREM Prime血小板裂解液,可以很大限度地減少微粒的形成。無菌性ELAREM Prime血小板裂解液經(jīng)過無菌處理。微生物培養(yǎng)測試為陰性。質(zhì)量控制測試在經(jīng)過認(rèn)證的測試實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行。國產(chǎn)的血小板裂解液好用么?達(dá)科為血小板裂解液使用比例
國產(chǎn)血小板裂解液哪個(gè)品牌好?進(jìn)口血小板裂解液價(jià)格多少
Sexton GMP級血小板裂解物產(chǎn)品在嚴(yán)格的GMP條件下生產(chǎn)和分裝,質(zhì)量檢驗(yàn)由CLIA認(rèn)證的實(shí)驗(yàn)室完成。DMF文件已在FDA登記。專為臨床使用而開發(fā)。富含各類生長因子, 是很好的胎牛血清替代物。 可用于培養(yǎng)間充質(zhì)干細(xì)胞, 脂肪干細(xì)胞, 皮膚成纖維細(xì)胞, 上皮細(xì)胞及內(nèi)皮細(xì)胞等。由美國Sexton Biotechnology公司研發(fā),該公司成立于2014年, 是一家技術(shù)先進(jìn)的生物公司, 著眼于細(xì)胞zhi liao的前沿領(lǐng)域, 目前, Sexton Biotechnology可提供間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)和CART細(xì)胞zhi liao相關(guān)產(chǎn)品,以及病毒和細(xì)胞制劑的無菌灌裝工藝。 進(jìn)口血小板裂解液價(jià)格多少
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