接種細胞:轉(zhuǎn)染前,用膠原酶(WORTHINGTONG公司LS004196)消化細胞并計數(shù)(不建議用胰酶)。調(diào)整細胞濃度,將細胞鋪入細胞培養(yǎng)的器皿,每個孔置入的細胞量應(yīng)能使轉(zhuǎn)染時細胞匯合度達到70~80%。2.準備DNA-PEI復(fù)合物:DNA、PEI試劑和稀釋劑在進行以下步驟前需先使其升至室溫。依據(jù)表1所示,用Opti-MEMITM(Invitrogen)或其他適合的無蛋白培養(yǎng)基稀釋適量DNA。用同樣的培養(yǎng)基稀釋PEI試劑。每1μgDNA需用1.5-5μL線性PEI轉(zhuǎn)染試劑(這個需要客戶自行摸索配比,每一批轉(zhuǎn)染試劑和每一批DNA比例可能會稍有不同)。一邊輕輕渦旋裝有DNA溶液的試管,一邊將稀釋的線性PEI轉(zhuǎn)染試劑滴加至試管中(注意:請勿顛倒添加順序)。充分混勻后,室溫靜置10~25min以形成DNA-PEI復(fù)合物。當溶液體積較大時,請用圓底聚丙烯管,例如NEST5mL/14mL離心管。3.轉(zhuǎn)染細胞:直接向每個孔中加入DNA-PEI復(fù)合物并輕輕渦旋培養(yǎng)板/培養(yǎng)皿。在無血清條件下轉(zhuǎn)染時,去除生長培養(yǎng)基,替換成無血清培養(yǎng)基,然后滴DNA-PEI復(fù)合物。轉(zhuǎn)染1.5h后,添加?體積的包含30%血清的生長培養(yǎng)基。更多PEI相關(guān)產(chǎn)品信息,歡迎咨詢上海曼博生物!如想申請PEI試用裝,請關(guān)注我們的公眾號:Mine-bio,回復(fù)關(guān)鍵詞“PEI申請”,即可參加!PEI轉(zhuǎn)染試劑有沒有毒性?安徽PEI轉(zhuǎn)染試劑試用裝轉(zhuǎn)染步驟
對于接觸抑制敏感的細胞,可適當降低鋪板密度。3.即使在有蛋白(如10%的血清)存在的情況下,DNA-PEI復(fù)合物仍能轉(zhuǎn)染細胞,但是DNA-PEI復(fù)合物必須在無蛋白存在的條件下形成。我們推薦使用Opti-MEMITM培養(yǎng)基以達到*轉(zhuǎn)染效率。其他的無蛋白培養(yǎng)基則需測試與線性PEI轉(zhuǎn)染試劑的兼容性。4.對大多數(shù)細胞來而言,每1μgDNA使用3.0μLEndoFectinTM試劑都能獲得較高轉(zhuǎn)染效率。使用者也可嘗試每1μgDNA使用1~4μL體積線性PEI轉(zhuǎn)染試劑進行優(yōu)化。更多關(guān)于Polysciences PEI相關(guān)內(nèi)容歡迎咨詢上海曼博生物!如想申請PEI試用裝,請關(guān)注我們的公眾號:Mine-bio,回復(fù)關(guān)鍵詞“PEI申請”,即可參加!?抗體表達PEI轉(zhuǎn)染試劑試用裝無批次差異23966-1和24765-1的PEI轉(zhuǎn)染試劑在哪里買呢?
產(chǎn)品簡介:Transporter 5轉(zhuǎn)染試劑是一種非GMP等級的即用型線性聚乙烯亞胺(PEI轉(zhuǎn)染試劑)溶液,由PEI MAX配置而成,采用0.1um PES無菌過濾器,完全消除支原體污染風險。Transporter 5將DNA縮聚成帶正電荷的復(fù)合物,這些復(fù)合物很容易通過內(nèi)吞作用進入細胞,并且Transporter 5-DNA 復(fù)合物能很好地抵御溶酶體的降解作用,有效提高轉(zhuǎn)染效率。適用于工藝開發(fā)、臨床前和早期臨床研究,可無縫過渡到MAXgene GMP用于商業(yè)化生產(chǎn)。Transporter 5轉(zhuǎn)染試劑能高效地將DNA轉(zhuǎn)染入HEK-293、CHO、COS、HELA、昆蟲(SF9、SF21) 等真核細胞系,可作用于大到135,000個核苷酸的質(zhì)粒,所以較大的質(zhì)粒也可以成功地轉(zhuǎn)染。 Transporter 5可節(jié)省試劑準備時間,加快項目進度。經(jīng)過嚴格的性能檢測,確保品質(zhì),在新藥研發(fā)過程中是一款快速、重復(fù)性好、可用于批量產(chǎn)的轉(zhuǎn)染試劑。產(chǎn)品特點:非GMP,研究級PEI轉(zhuǎn)染試劑溶液;高轉(zhuǎn)染效率;無縫過渡到MAXgene GMP;易放大,可預(yù)測產(chǎn)量;用于工藝開發(fā),臨床前和早期臨床研究。如想申請PEI試用裝,請關(guān)注我們的公眾號:Mine-bio,回復(fù)關(guān)鍵詞“PEI申請”,即可參加!
美國Polysciences成立于1961年,是一家歷史久遠的化學品制造公司,產(chǎn)品guang fan應(yīng)用于各個科研領(lǐng)域。Polysciences在聚乙烯亞胺轉(zhuǎn)染試劑(PEI轉(zhuǎn)染試劑)的制造工藝上具有長達20多年的經(jīng)驗,其經(jīng)典的PEI轉(zhuǎn)染試劑產(chǎn)品系列包括研究級產(chǎn)品PEI 25K,PEI MAX和Transporter 5,以及cGMP級MAXgene GMP,被guang fan用于抗體藥物和重組蛋白,臨床等級慢病毒和AAV病毒的大規(guī)模生產(chǎn),為全球客戶提供成本效益高、供應(yīng)穩(wěn)定和質(zhì)量可靠的選擇。在過去10年間,Polysciences的PEI轉(zhuǎn)染試劑已被用于國內(nèi)外多項臨床申報。如想申請PEI試用裝,請關(guān)注我們的公眾號:Mine-bio,回復(fù)關(guān)鍵詞“PEI申請”,即可參加!用PEI轉(zhuǎn)染試劑時,一般和DNA的比例是多少呢?
線性PEI轉(zhuǎn)染試劑是一種陽離子聚合物,分子量25000,它能與核酸形成復(fù)合物,并使該復(fù)合物進入哺乳動物細胞。線性PEI轉(zhuǎn)染試劑廣適用于常見細胞系,如HEK-293、HEK293T、HepG2、Hela、CHO-K1、COS-1、COS-7、NIH/3T3和Sf9等。該試劑即使在有血清存在的情況下,它仍然能的將核酸導入細胞。78bio公司提供的線性PEI轉(zhuǎn)染試劑具有如下優(yōu)點:優(yōu)越的轉(zhuǎn)染效率,重組蛋白的高表達水平,與含血清的培養(yǎng)基相兼容,低細胞毒性,易于操作?質(zhì)量控制每批次線性PEI轉(zhuǎn)染試劑均經(jīng)過轉(zhuǎn)染測試。將eGFP表達質(zhì)粒(GeneCopoeiaCat.No.EX-EGFP-Lv01)用EndoFectinTM-Plus轉(zhuǎn)染試劑轉(zhuǎn)入亞融合狀態(tài)的HEK-293細胞,轉(zhuǎn)染16h后,超過95%的細胞表達eGFP。更多關(guān)于PEI轉(zhuǎn)染試劑相關(guān)的產(chǎn)品信息,歡迎咨詢上海曼博生物!如想申請PEI試用裝,請關(guān)注我們的公眾號:Mine-bio,回復(fù)關(guān)鍵詞“PEI申請”,即可參加!用PEI轉(zhuǎn)染試劑時出現(xiàn)沉淀是什么原因?安徽PEI轉(zhuǎn)染試劑試用裝適用于293細胞轉(zhuǎn)染
PEI轉(zhuǎn)染試劑和其他轉(zhuǎn)染試劑相比有什么優(yōu)勢?安徽PEI轉(zhuǎn)染試劑試用裝轉(zhuǎn)染步驟
Polysciences 轉(zhuǎn)染試劑系列是基于聚乙烯亞胺(Polyethylenimine,PEI)的產(chǎn)品,因其較高的轉(zhuǎn)染效果,已廣泛應(yīng)用于工業(yè)化生產(chǎn)。聚乙烯亞胺是一種具有較高的陽離子電荷密度的有機大分子,每相隔二個碳原子,即每“第三個原子都是質(zhì)子化的氨基氮原子,使得聚合物網(wǎng)絡(luò)在任何pH下都能充當有效的“質(zhì)子海綿”體(proton sponge)。PEI可用作轉(zhuǎn)染試劑,它可以縮聚DNA分子形成顆粒并轉(zhuǎn)染真核細胞。有實驗證明,分子量為25000的線性PEI即Polysciences 23966(PEI 25K)轉(zhuǎn)染效率表現(xiàn)優(yōu)良。如想申請PEI試用裝,請關(guān)注我們的公眾號:Mine-bio,回復(fù)關(guān)鍵詞“PEI申請”,即可參加!安徽PEI轉(zhuǎn)染試劑試用裝轉(zhuǎn)染步驟