即用型PEI轉(zhuǎn)染試劑哪個(gè)品牌好

來(lái)源: 發(fā)布時(shí)間:2024-10-11

穩(wěn)定轉(zhuǎn)染方法:1.接種細(xì)胞:轉(zhuǎn)染前一晚,用膠原酶(WORTHINGTONG公司LS004196)消化細(xì)胞并計(jì)數(shù)(不建議用胰酶)。調(diào)整細(xì)胞濃度,將細(xì)胞鋪入細(xì)胞培養(yǎng)的器皿,每個(gè)孔置入的細(xì)胞量應(yīng)能使轉(zhuǎn)染時(shí)細(xì)胞匯合度達(dá)到70~80%。2.準(zhǔn)備DNA-PEI復(fù)合物:DNA、PEI試劑和稀釋劑在進(jìn)行以下步驟前需先使其升至室溫。依據(jù)表1所示,用Opti-MEMITM(Invitrogen)或其他適合的無(wú)蛋白培養(yǎng)基稀釋適量DNA。用同樣的培養(yǎng)基稀釋PEI試劑。每1μgDNA需用1.5-5μL線性PEI轉(zhuǎn)染試劑(這個(gè)需要客戶自行摸索配比,每一批轉(zhuǎn)染試劑和每一批DNA比例可能會(huì)稍有不同)。一邊輕輕渦旋裝有DNA溶液的試管,一邊將稀釋的線性PEI轉(zhuǎn)染試劑滴加至試管中(注意:請(qǐng)勿顛倒添加順序)。充分混勻后,室溫靜置10~25min以形成DNA-PEI復(fù)合物。當(dāng)溶液體積較大時(shí),請(qǐng)用圓底聚丙烯管,例如NEST5mL/14mL離心管。3.轉(zhuǎn)染細(xì)胞:直接向每個(gè)孔中加入DNA-PEI復(fù)合物并輕輕渦旋培養(yǎng)板/培養(yǎng)皿。在無(wú)血清條件下轉(zhuǎn)染時(shí),去除生長(zhǎng)培養(yǎng)基,替換成無(wú)血清培養(yǎng)基,然后滴DNA-PEI復(fù)合物。轉(zhuǎn)染1.5h后,添加?體積的包含30%血清的生長(zhǎng)培養(yǎng)基。歡迎關(guān)注我們的公眾號(hào):Mine-bio ,私信回復(fù)關(guān)鍵詞“PEI申請(qǐng)“即可申請(qǐng)PEI試用裝!PEI轉(zhuǎn)染試劑的殘留檢測(cè)方法怎么開(kāi)發(fā)?即用型PEI轉(zhuǎn)染試劑哪個(gè)品牌好

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上海曼博生物醫(yī)藥科技有限公司成立于2019年,依托于集團(tuán)公司泉心泉意深厚的資源和超過(guò)400家國(guó)內(nèi)客戶群體,生命科學(xué)領(lǐng)域一站式供應(yīng)鏈體系,以及高風(fēng)險(xiǎn)生物危險(xiǎn)材料進(jìn)出口平臺(tái)的優(yōu)勢(shì),曼博生物嚴(yán)格篩選國(guó)際創(chuàng)新且經(jīng)過(guò)同行驗(yàn)證過(guò)的產(chǎn)品和技術(shù),引入中國(guó)市場(chǎng),開(kāi)發(fā)、孵育和推廣,致力于將全球創(chuàng)新產(chǎn)品和前沿技術(shù)帶入中國(guó),集中在為細(xì)胞/基因領(lǐng)域、/免疫,抗體藥物研發(fā)客戶提供小眾創(chuàng)新產(chǎn)品,包括從Researchgrade到cGMP等級(jí)的無(wú)動(dòng)物源培養(yǎng)基質(zhì),轉(zhuǎn)染試劑、病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)試劑、基因編輯工具等產(chǎn)品和定制服務(wù),支持ATMP(AdvanceTherapyMedicinalProducts)藥物研發(fā)從R&D到Clinicaltrial以及后期商業(yè)化的無(wú)縫轉(zhuǎn)化。更多關(guān)于Polysciences PEI相關(guān)產(chǎn)品問(wèn)題,歡迎咨詢上海曼博生物!也歡迎關(guān)注我們的公眾號(hào):Mine-Bio.化學(xué)合成PEI轉(zhuǎn)染試劑殘留檢測(cè)方法有哪些品牌的PEI轉(zhuǎn)染試劑?

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對(duì)于某些類型的細(xì)胞如HEK-293、HEK293T、NIH/3T3和COS細(xì)胞,在轉(zhuǎn)染前兩天鋪板可顯著提高轉(zhuǎn)入基因的表達(dá)水平。如果選擇轉(zhuǎn)染前兩天鋪板,可適當(dāng)降低鋪板密度,以確保轉(zhuǎn)染時(shí)細(xì)胞的匯合度仍為70~80%。2.對(duì)于接觸抑制敏感的細(xì)胞,可適當(dāng)降低鋪板密度。3.即使在有蛋白(如10%的血清)存在的情況下,DNA-PEI復(fù)合物仍能轉(zhuǎn)染細(xì)胞,但是DNA-PEI復(fù)合物必須在無(wú)蛋白存在的條件下形成。我們推薦使用Opti-MEMITM培養(yǎng)基以達(dá)到*轉(zhuǎn)染效率。其他的無(wú)蛋白培養(yǎng)基則需測(cè)試與線性PEI轉(zhuǎn)染試劑的兼容性。更多關(guān)于PEI轉(zhuǎn)染試劑相關(guān)產(chǎn)品技術(shù)問(wèn)題,歡迎咨詢上海曼博生物!也歡迎關(guān)注我們的公眾號(hào):Mine-Bio.

注意事項(xiàng)質(zhì)粒質(zhì)量:請(qǐng)務(wù)必使用高質(zhì)量轉(zhuǎn)染級(jí)無(wú)內(nèi)質(zhì)粒(推薦使用QIAGEN或者M(jìn)N公司去內(nèi)質(zhì)粒提取試劑盒)。通過(guò)260nm光吸收測(cè)定DNA濃度,260nm/280nm比值確定DNA純度(比值應(yīng)該在1.8~2.0的范圍之內(nèi))。如有可能,請(qǐng)通過(guò)瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)質(zhì)粒的完整性。細(xì)胞條件:使用適當(dāng)保存和經(jīng)常傳代的健康細(xì)胞。確保培養(yǎng)基沒(méi)有被細(xì)菌、或支原體污染。如果細(xì)胞是近期復(fù)蘇的液氮凍存細(xì)胞,請(qǐng)?jiān)谵D(zhuǎn)染前至少傳代兩次。建議使用GIBCO或者78bio公司血清培養(yǎng)細(xì)胞。近期還有PEIfree申請(qǐng)活動(dòng),歡迎咨詢上海曼博生物!歡迎關(guān)注我們的公眾號(hào):Mine-bio,回復(fù)關(guān)鍵詞“申請(qǐng)PEI”,即可參加活動(dòng)!更多關(guān)于Polysciences PEI轉(zhuǎn)染試劑相關(guān)產(chǎn)品信息,歡迎咨詢上海曼博生物!哪個(gè)品牌的PEI轉(zhuǎn)染試劑性價(jià)比會(huì)比較高呢?

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材料:質(zhì)粒DNA指數(shù)生長(zhǎng)的真核細(xì)胞PEI(聚乙烯亞胺)1×HBS(pH7.4)配方:PEI儲(chǔ)存液(100μM):稱取125mgPEI粉末溶解于50ml1×HBS(pH7.4)中,0.2μm濾膜過(guò)濾,儲(chǔ)存于4℃?zhèn)溆谩?×HBS(pH7.4):將8.76gNaCl溶解于900ml超純水,加入20ml1M的HEPES,調(diào)pH值到7.4,定容至1L,過(guò)濾(0.2μm濾膜)后儲(chǔ)存于4℃?zhèn)溆谩7椒ǎ?.細(xì)胞分盤(pán):通過(guò)胰酶消化收集細(xì)胞,用適當(dāng)?shù)耐耆囵B(yǎng)基以4×105至8×105細(xì)胞/cm2的密度平鋪細(xì)胞于60mm組織培養(yǎng)皿上(根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要選擇培養(yǎng)皿,使細(xì)胞貼壁后所占總面積達(dá)到培養(yǎng)皿面積的70-90%)。根據(jù)細(xì)胞貼壁情況于含5%CO2的37℃溫箱中孵育8-24h,當(dāng)細(xì)胞貼壁完全后即可開(kāi)始轉(zhuǎn)染。轉(zhuǎn)染前換入2mL預(yù)熱的無(wú)血清培養(yǎng)基。更多產(chǎn)品信息,歡迎咨詢上海曼博生物!有哪些比較好的轉(zhuǎn)染試劑?MirusPEI轉(zhuǎn)染試劑優(yōu)化方案

PEI轉(zhuǎn)染試劑是一種高分子化學(xué)類轉(zhuǎn)染試劑。即用型PEI轉(zhuǎn)染試劑哪個(gè)品牌好

PEIMAX——高產(chǎn)工業(yè)化轉(zhuǎn)染試劑-高度濃縮,可制備大量轉(zhuǎn)染試劑Polysciences轉(zhuǎn)染試劑系列是基于聚乙烯亞胺(Polyethylenimine,PEI)的產(chǎn)品,因其較高的轉(zhuǎn)染效果,已廣泛應(yīng)用于工業(yè)化生產(chǎn)。聚乙烯亞胺是一種具有較高的陽(yáng)離子電荷密度的有機(jī)大分子,每相隔二個(gè)碳原子,即每“第三個(gè)原子都是質(zhì)子化的氨基氮原子,使得聚合物網(wǎng)絡(luò)在任何pH下都能充當(dāng)有效的“質(zhì)子海綿”(protonsponge)體。PEI可用作轉(zhuǎn)染試劑,它可以縮聚DNA分子形成顆粒并轉(zhuǎn)染真核細(xì)胞。PEIMAX40K是由Polysciences出品的全合成線性聚乙烯亞胺瞬時(shí)轉(zhuǎn)染試劑。PEIMAX是一款高度濃縮的粉劑,大量科學(xué)家選擇PEIMAX,在內(nèi)部自行制備低成本高效益的PEI轉(zhuǎn)染試劑。多年以來(lái),經(jīng)過(guò)眾多業(yè)內(nèi)人士評(píng)審的公開(kāi)研究和出版文獻(xiàn)表明,在HEK293、CHO和Sf9系統(tǒng)中可獲得很高的轉(zhuǎn)染效率,在重組抗體和病毒載體生產(chǎn)中穩(wěn)定性高,可靠性強(qiáng)。PEIMAX提供從96孔板到200L生物反應(yīng)器持續(xù)的高基因表達(dá)細(xì)胞體系,實(shí)現(xiàn)從新藥研發(fā)到工業(yè)化生產(chǎn)的輕松過(guò)度。而且與大多數(shù)細(xì)胞轉(zhuǎn)染方案相比,使用PEIMAX至少可降低40%轉(zhuǎn)染成本(部分案例可降低90%轉(zhuǎn)染成本)。更多PEI MAX相關(guān)產(chǎn)品信息,歡迎咨詢上海曼博生物!即用型PEI轉(zhuǎn)染試劑哪個(gè)品牌好