山東小型超濾離心管咨詢

避免過度濃縮，體積越小，越容易因表面吸附而損失得率。離心后用Tips輕輕吹吸幾次濾膜截留的溶液，必要時補(bǔ)加一定體積的緩沖液沖洗膜表面，有助于減少膜表面吸附，能提高回收率。盡量避免Tips接觸膜表面。離心管是一個簡單的可以承受高轉(zhuǎn)速壓力的管子,比如離一些樣品,分離出上清沉淀。超濾離心管會有一個類似于內(nèi)管和外管的兩個部分,內(nèi)管中是帶有一定分子量的膜,當(dāng)高速離心時,分子量比它小的就漏到下面的管子（即外管）中了,分子量比它大的就截留在上面（即內(nèi)管中）,就是超濾的原理.常用于濃縮樣品。 超濾離心管通常不需要預(yù)處理即可使用，不過對于蛋白質(zhì)樣本處理，特別是較稀的蛋白質(zhì)溶液來說(<10ug/mL),用超濾膜濃縮回收率常常是不定量的。超濾離心管可以有效地去除溶液中的雜質(zhì)，使樣品更純凈。山東小型超濾離心管咨詢

超濾管采用其特有的再生纖維素膜，定義為：一個確定NMWL 的超濾膜應(yīng)該截留至少90% 以上的這個大小的球形分子，即100kDa的球形蛋白用100k的再生纖維素膜得率超過90%。請仔細(xì)查看以下默克生命科學(xué)官方數(shù)據(jù)：(以0.5mL的AU0.5為例，其它型號截留分子量的選擇原則一致，具體離心力和離心時間不同。截留分子量選小啦！看到這個表，你是否發(fā)現(xiàn)原來抱怨超濾管流速偏慢的根源來自對于截留分子量定義的誤解。膜孔徑要小于目的分子這是一原則。如果分子有近似球形的立體結(jié)構(gòu)(而非明顯的線性分子)，在再生纖維素超濾膜體系內(nèi)，選擇“等于”或“略小于”目的分子的截留分子量的超濾管是較佳選擇，這樣操作起來又快又好，既保證了樣品回收率，又縮短了離心時間，大幅降低大分子損傷風(fēng)險。嘉興再生纖維素離心管廠家電話使用超濾離心管時應(yīng)注意保持樣品干燥、無污染和清潔。

當(dāng)濃縮到剩下1ml時，取50ul緩沖溶液，加入10ul流穿，看有沒變藍(lán)色，以此判斷超濾管是否漏掉蛋白。如果管漏了，將上層和流穿重新倒入新管中開始超濾。要精確判斷是否漏管，用5mgml的BSA離心10min，再取流穿，跑蛋白膠或Bradford粗測，繼續(xù)加入剩下的蛋白液濃縮（在冰上操作，防止蛋白受熱），直到所有濃縮液都加完為止。離心過程中注意是否發(fā)生蛋白沉淀，導(dǎo)致堵管。若發(fā)生沉淀，要確定沉淀的具體原因，是蛋白濃度過高還是Buffer不合適；前者可用多根超濾管同時超濾，降低濃度的辦法解決，后者的方法是換不同的緩沖溶液，直到蛋白不發(fā)生沉淀為止。

蛋白質(zhì)濃縮和替代緩沖液常用的超濾管，微孔(mwco10kd)常用的micon-ultra-15超濾管。根據(jù)靶蛋白的分子量、濃縮前的體積和濃縮的靶體積，還可提供不同尺寸和尺寸的其他類型的mwco超濾管。它可以重復(fù)使用。1。選擇合適的超濾管主要考慮分子量和濃度。通常靶蛋白的分子量不應(yīng)大于靶蛋白分子量的1/3。例如，當(dāng)靶蛋白的分子量為35kDa時，可以選擇靶蛋白分子量為10kDa的超濾管。如果靶蛋白的分子量約為10kd，則可使用分子量為3kd的超濾管。2。新購買的超濾是干燥的。使用前加入Milliq水。水的體積完全覆蓋在膜上，冰浴或冰箱被預(yù)先冷卻幾分鐘。倒出水后，可以加入蛋白質(zhì)溶液。蛋白質(zhì)添加量不超過管頂白線。超濾管在加入蛋白質(zhì)溶液前需要在冰上預(yù)先冷卻。三。平衡。使用超濾離心管時，應(yīng)注意控制轉(zhuǎn)速，以避免過度旋轉(zhuǎn)導(dǎo)致超濾膜損壞或溢出樣品。

離心機(jī)的加速度調(diào)至較低檔，減小對膜的壓力。注意，一定要等離心機(jī)達(dá)到目的轉(zhuǎn)速之后，方可離開離心機(jī)，否則離心機(jī)出問題時，無法一時間處理。膜與轉(zhuǎn)軸的方向根據(jù)說明書調(diào)整（角轉(zhuǎn)離心機(jī)的情況是膜與軸垂直）。在實際使用中，一般轉(zhuǎn)速開的比說明書里的要低，這樣可以延長離心管的使用壽命。當(dāng)濃縮到剩下1ml時，取50ul緩沖溶液，加入10ul流穿，看有沒變藍(lán)色，以此判斷超濾管是否漏掉蛋白。如果管漏了，將上層和流穿重新倒入新管中開始超濾。要精確判斷是否漏管，用5mgml的BSA離心10min，再取流穿，跑蛋白膠或Bradford粗測，繼續(xù)加入剩下的蛋白液濃縮（在冰上操作，防止蛋白受熱），直到所有濃縮液都加完為止。使用超濾離心管時應(yīng)注意避免過度旋轉(zhuǎn)造成樣品變性或降解，并影響后續(xù)實驗結(jié)果。北京再生纖維素離心管咨詢

超濾離心管利用超濾膜的過濾作用將目標(biāo)物質(zhì)從混合物中分離出來。山東小型超濾離心管咨詢

我們通常會以1/3到1/6甚至更低的區(qū)間來選擇超濾管的孔徑，通常更小的孔徑會使回收率提高但是超濾的時間也會比較長。一定范圍內(nèi)，超濾的回收率和速度是一對矛盾體，因此可以通過優(yōu)化孔徑的選擇，在回收率可以接受的條件下選擇較大的孔徑，來提高超濾的速度。低溫如< 10 ℃，液體的粘度會增加，流動性會降低，因此液體的跨膜速率也會降低。適當(dāng)提高超濾溫度，往往能夠提高超濾的速度。有些客戶需要做幾十ml到幾百ml樣品的濃縮或者緩沖液置換，但是卻使用1支或幾支15ml的超濾管反復(fù)離心來完成操作，這樣必然造成時間上的浪費。怎么辦？一定要挑選適合處理量的產(chǎn)品，減少不必要的反復(fù)離心從而提升超濾的效率。山東小型超濾離心管咨詢