40KPEI轉(zhuǎn)染試劑常見問題

注意事項質(zhì)粒質(zhì)量：請務(wù)必使用高質(zhì)量轉(zhuǎn)染級無內(nèi)質(zhì)粒（推薦使用QIAGEN或者M(jìn)N公司去內(nèi)質(zhì)粒提取試劑盒）。通過260nm光吸收測定DNA濃度，260nm/280nm比值確定DNA純度（比值應(yīng)該在1.8~2.0的范圍之內(nèi)）。如有可能，請通過瓊脂糖凝膠電泳檢測質(zhì)粒的完整性。細(xì)胞條件：使用適當(dāng)保存和經(jīng)常傳代的健康細(xì)胞。確保培養(yǎng)基沒有被細(xì)菌、或支原體污染。如果細(xì)胞是近期復(fù)蘇的液氮凍存細(xì)胞，請在轉(zhuǎn)染前至少傳代兩次。建議使用GIBCO或者78bio公司血清培養(yǎng)細(xì)胞。更多關(guān)于轉(zhuǎn)染試劑相關(guān)問題，歡迎咨詢上海曼博生物！PEI轉(zhuǎn)染試劑對復(fù)合物孵化的時間是有要求的，一般建議5~20分鐘之間。40KPEI轉(zhuǎn)染試劑常見問題

方法：1．細(xì)胞分盤：通過胰酶消化收集細(xì)胞，用適當(dāng)?shù)耐耆囵B(yǎng)基以4×105至8×105細(xì)胞/cm2的密度平鋪細(xì)胞于60mm組織培養(yǎng)皿上（根據(jù)實驗需要選擇培養(yǎng)皿，使細(xì)胞貼壁后所占總面積達(dá)到培養(yǎng)皿面積的70-90％）。根據(jù)細(xì)胞貼壁情況于含5％CO2的37℃溫箱中孵育8-24h,當(dāng)細(xì)胞貼壁完全后即可開始轉(zhuǎn)染。轉(zhuǎn)染前換入2mL預(yù)熱的無血清培養(yǎng)基。2.制備PEI-DNA混合物：以60mm組織培養(yǎng)皿用420μL反應(yīng)總體積為例。準(zhǔn)備兩支1.5mL離心管，一管將質(zhì)粒DNA（總量2-8μg為佳）加入240μLHBS中，混勻。另一管中則用HBS將100μM的PEI儲存液稀釋成10μM，充分混合。然后取180μL10μMPEI溶液加入含有DNA的HBS中，充分混勻后室溫靜置20-30min。將這420μL的PEI-DNA混合液逐滴加入上述單層細(xì)胞的細(xì)胞培養(yǎng)基中，輕輕搖動平皿混勻，置于含5％～7％CO2的37℃溫箱孵育。注：每次用100μM的PEI儲存液前都需要先將其充分混勻，保證所取的濃度一致。3.培養(yǎng)6-10h后更換為37℃預(yù)熱的含有血清的培養(yǎng)基，繼續(xù)培養(yǎng)，16h左右可以觀測到報告基因的表達(dá)。更多關(guān)于PEI轉(zhuǎn)染試劑相關(guān)產(chǎn)品問題，歡迎咨詢上海曼博生物！40KPEI轉(zhuǎn)染試劑價格多少用PEI轉(zhuǎn)染時，一般和DNA的比例是多少呢？

1、對于某些類型的細(xì)胞如HEK-293、HEK293T、NIH/3T3和COS細(xì)胞，在轉(zhuǎn)染前兩天鋪板可顯著提高轉(zhuǎn)入基因的表達(dá)水平。如果選擇轉(zhuǎn)染前兩天鋪板，可適當(dāng)降低鋪板密度，以確保轉(zhuǎn)染時細(xì)胞的匯合度仍為70~80%。

2、對于接觸抑制敏感的細(xì)胞，可適當(dāng)降低鋪板密度。

3、即使在有蛋白（如10%的血清）存在的情況下，DNA-PEI復(fù)合物仍能轉(zhuǎn)染細(xì)胞，但是DNA-PEI復(fù)合物必須在無蛋白存在的條件下形成。我們推薦使用Opti-MEMITM培養(yǎng)基以達(dá)到*轉(zhuǎn)染效率。其他的無蛋白培養(yǎng)基則需測試與線性PEI轉(zhuǎn)染試劑的兼容性。

接種細(xì)胞：轉(zhuǎn)染前，用膠原酶（WORTHINGTONG公司LS004196)消化細(xì)胞并計數(shù)（不建議用胰酶）。調(diào)整細(xì)胞濃度，將細(xì)胞鋪入細(xì)胞培養(yǎng)的器皿，每個孔置入的細(xì)胞量應(yīng)能使轉(zhuǎn)染時細(xì)胞匯合度達(dá)到70~80%。2.準(zhǔn)備DNA-PEI復(fù)合物：DNA、PEI試劑和稀釋劑在進(jìn)行以下步驟前需先使其升至室溫。依據(jù)表1所示，用Opti-MEMITM（Invitrogen）或其他適合的無蛋白培養(yǎng)基稀釋適量DNA。用同樣的培養(yǎng)基稀釋PEI試劑。每1μgDNA需用1.5-5μL線性PEI轉(zhuǎn)染試劑(這個需要客戶自行摸索配比，每一批轉(zhuǎn)染試劑和每一批DNA比例可能會稍有不同）。一邊輕輕渦旋裝有DNA溶液的試管，一邊將稀釋的線性PEI轉(zhuǎn)染試劑滴加至試管中（注意：請勿顛倒添加順序）。充分混勻后，室溫靜置10~25min以形成DNA-PEI復(fù)合物。當(dāng)溶液體積較大時，請用圓底聚丙烯管，例如NEST5mL/14mL離心管。3.轉(zhuǎn)染細(xì)胞：直接向每個孔中加入DNA-PEI復(fù)合物并輕輕渦旋培養(yǎng)板/培養(yǎng)皿。在無血清條件下轉(zhuǎn)染時，去除生長培養(yǎng)基，替換成無血清培養(yǎng)基，然后滴DNA-PEI復(fù)合物。轉(zhuǎn)染1.5h后，添加?體積的包含30%血清的生長培養(yǎng)基。用PEI轉(zhuǎn)染時，一般和DNA的比例會是多少呢？

瞬時轉(zhuǎn)染方法：1.接種細(xì)胞：轉(zhuǎn)染前一晚，用膠原酶（WORTHINGTONG公司LS004196)消化細(xì)胞并計數(shù)（不建議用胰酶）。調(diào)整細(xì)胞濃度，將細(xì)胞鋪入細(xì)胞培養(yǎng)的器皿，每個孔置入的細(xì)胞量應(yīng)能使轉(zhuǎn)染時細(xì)胞匯合度達(dá)到70~80%。2.準(zhǔn)備DNA-PEI復(fù)合物：DNA、PEI試劑和稀釋劑在進(jìn)行以下步驟前需先使其升至室溫。，用Opti-MEMITM（Invitrogen）或其他適合的無蛋白培養(yǎng)基稀釋適量DNA。用同樣的培養(yǎng)基稀釋PEI試劑。每1μgDNA需用1.5-5μL線性PEI轉(zhuǎn)染試劑。一邊輕輕渦旋裝有DNA溶液的試管，一邊將稀釋的線性PEI轉(zhuǎn)染試劑滴加至試管中（注意：請勿顛倒添加順序）。充分混勻后，室溫靜置10~25min以形成DNA-PEI復(fù)合物。當(dāng)溶液體積較大時，請用圓底聚丙烯管，例如NEST5mL/14mL離心管。3.轉(zhuǎn)染細(xì)胞：直接向每個孔中加入DNA-PEI復(fù)合物并輕輕渦旋培養(yǎng)板/培養(yǎng)皿。在無血清條件下轉(zhuǎn)染時，去除生長培養(yǎng)基，替換成無血清培養(yǎng)基，然后滴DNA-PEI復(fù)合物。轉(zhuǎn)染1.5h后，添加?體積的包含30%血清的生長培養(yǎng)基。4.孵育細(xì)胞和分析結(jié)果：在CO2培養(yǎng)箱中37℃下孵育細(xì)胞至可以分析檢測。轉(zhuǎn)染后5h即可檢測到轉(zhuǎn)入基因的表達(dá)。請自行確定適合檢測時間。更多關(guān)于PEI轉(zhuǎn)染試劑相關(guān)產(chǎn)品問題，歡迎咨詢上海曼博生物！PEI轉(zhuǎn)染試劑主要成分是什么呢？40KPEI轉(zhuǎn)染試劑優(yōu)化方案

Polysciences PEI轉(zhuǎn)染試劑不含動物源成分。40KPEI轉(zhuǎn)染試劑常見問題

Polysciences是一家化學(xué)品制造公司，產(chǎn)品廣泛應(yīng)用于各個科研領(lǐng)域。公司成立于1961年，起初為電子顯微鏡提供納米級樣本制備方案，幫助科學(xué)家揭示未知領(lǐng)域。隨后，開拓了在病理（組織研究）應(yīng)用產(chǎn)品，使組織除了石蠟包埋外，還能夠包埋在塑料塊中；開發(fā)染料和染色劑，以實現(xiàn)更好的樣品觀測方式。與government合作，開發(fā)了用于診斷試劑盒應(yīng)的聚合物微球。與美國國家cancer中心合作，開發(fā)天然產(chǎn)物分離和純化產(chǎn)品，并用于紫杉醇的初步臨床試驗。繼而開發(fā)出超順磁珠，用于DNA、蛋白質(zhì)和肽的研究。Polysciences的高純度單體和聚合物產(chǎn)品在醫(yī)療器械中有許多應(yīng)用，并不斷開發(fā)和增強其性能。近期業(yè)務(wù)擴展到電子產(chǎn)品，Polysciences的精密微粒子產(chǎn)品拓展了納米技術(shù)應(yīng)用中測量精度。公司秉承為應(yīng)用而研發(fā)，目前已擁有超過3000種產(chǎn)品。PolysciencesInc.致力于提供先進(jìn)的技術(shù)、制造能力和技術(shù)支持，幫助客戶實現(xiàn)他們的目標(biāo)。細(xì)胞轉(zhuǎn)染實驗是生物醫(yī)學(xué)實驗室中常規(guī)的研究手段，目的是把外源基因、蛋白或者小分子導(dǎo)入到靶細(xì)胞內(nèi)。目前主要有三種主流方法：生物轉(zhuǎn)染，物理轉(zhuǎn)染和化學(xué)轉(zhuǎn)染。40KPEI轉(zhuǎn)染試劑常見問題