PEI轉染試劑使用注意事項

對于某些類型的細胞如HEK-293、HEK293T、NIH/3T3和COS細胞，在轉染前兩天鋪板可顯著提高轉入基因的表達水平。如果選擇轉染前兩天鋪板，可適當降低鋪板密度，以確保轉染時細胞的匯合度仍為70~80%。2.對于接觸抑制敏感的細胞，可適當降低鋪板密度。3.即使在有蛋白（如10%的血清）存在的情況下，DNA-PEI復合物仍能轉染細胞，但是DNA-PEI復合物必須在無蛋白存在的條件下形成。我們推薦使用Opti-MEMITM培養(yǎng)基以達到*轉染效率。其他的無蛋白培養(yǎng)基則需測試與線性PEI轉染試劑的兼容性。Polysciences 是一家化學品制造公司，產品廣泛應用于各個科研領域。公司成立于1961年，起初為電子顯微鏡提供納米級樣本制備方案，幫助科學家揭示未知領域。有哪些比較好的轉染試劑嗎?PEI轉染試劑使用注意事項

接種細胞：轉染前，用膠原酶（WORTHINGTONG公司LS004196)消化細胞并計數(shù)（不建議用胰酶）。調整細胞濃度，將細胞鋪入細胞培養(yǎng)的器皿，每個孔置入的細胞量應能使轉染時細胞匯合度達到70~80%。2.準備DNA-PEI復合物：DNA、PEI試劑和稀釋劑在進行以下步驟前需先使其升至室溫。依據(jù)表1所示，用Opti-MEMITM（Invitrogen）或其他適合的無蛋白培養(yǎng)基稀釋適量DNA。用同樣的培養(yǎng)基稀釋PEI試劑。每1μgDNA需用1.5-5μL線性PEI轉染試劑(這個需要客戶自行摸索配比，每一批轉染試劑和每一批DNA比例可能會稍有不同）。一邊輕輕渦旋裝有DNA溶液的試管，一邊將稀釋的線性PEI轉染試劑滴加至試管中（注意：請勿顛倒添加順序）。充分混勻后，室溫靜置10~25min以形成DNA-PEI復合物。當溶液體積較大時，請用圓底聚丙烯管，例如NEST5mL/14mL離心管。3.轉染細胞：直接向每個孔中加入DNA-PEI復合物并輕輕渦旋培養(yǎng)板/培養(yǎng)皿。在無血清條件下轉染時，去除生長培養(yǎng)基，替換成無血清培養(yǎng)基，然后滴DNA-PEI復合物。轉染1.5h后，添加?體積的包含30%血清的生長培養(yǎng)基。更多關于Polysciences PEI轉染試劑，歡迎咨詢上海曼博生物！聚乙烯亞胺PEI轉染試劑常見問題用PEI轉染試劑時出現(xiàn)沉淀是什么原因呢？

PEI在于可以應用于體內試驗。當初試驗經(jīng)費很有限，被逼無奈只能放棄脂質體2000，選擇PEI，以至于相當長的時間內，轉染試驗都不順利。下面是幾點關于PEI轉染的注意要點：1.PEI的使用量可以參照脂質體2000的說明書，所用質粒盡量去內2.轉染時，一定要把PEI+DMEM加入到質粒+DMEM中，順序不可錯，輕微混勻，靜止20min3.轉染后4小時，一定要換液！換含有FBS的完全培養(yǎng)液！因為PEI對細胞毒性太大4.如果后續(xù)試驗涉及到穩(wěn)定篩選，建議把血清濃度適當提高。

PS：事實證明，PEI是可行的，已經(jīng)做出穩(wěn)定細胞系了。

細胞轉染實驗是生物醫(yī)學實驗室中常規(guī)的研究手段，目的是把外源基因、蛋白或者小分子導入到靶細胞內。目前主要有三種主流方法：生物轉染，物理轉染和化學轉染。其中生物轉染主要是利用病毒等微生物作為基因導入載體，以慢病毒、腺病毒和腺相關病毒等常見，其侵染效率可以達到90%以上，但常因安全性等問題，很多實驗室對其敬而遠之。物理轉染主要包括顯微注射、電穿孔和基因，無論哪一種都需要特定的設備，且一分錢一分貨，性能好的價格也都很性感。上海曼博生物是Polysciences官方授權du jia代理商，更多關于轉染試劑相關問題，歡迎咨詢上海曼博生物！哪個品牌的PEI轉染試劑性價比更高？

對大多數(shù)細胞來而言，每1μgDNA使用3.0μLPEIMAX轉染試劑都能獲得較高轉染效率。使用者也可嘗試每1μgDNA使用1.5~4μL體積線性PEIMAX轉染試劑進行優(yōu)化。PEIMAX(MW40,000)為Polysciences公司生產的化合物產品，每批產品出廠前都經(jīng)過嚴格的檢測,保證每批產品都100%合格、穩(wěn)定且品質高,但由于作為轉染試劑使用過程中有很多實驗室因素(配置方法，PH,水純度,稱量的準度,dnaRNA純度,細胞狀態(tài)，細胞品系…)造成溶解出現(xiàn)問題或者轉染效率出現(xiàn)差異,所以廠家只受理該產品純度，分子量及重量缺失破損等相關投訴，針對極個別客戶溶解問題和轉染效率問題我們能友善解決。PEI轉染試劑在使用時出現(xiàn)沉淀的原因是什么？線性PEI轉染試劑說明書

PEI轉染試劑有毒性嗎？PEI轉染試劑使用注意事項

線性PEI轉染試劑是一種陽離子聚合物，分子量25000，它能與核酸形成復合物，并使該復合物進入哺乳動物細胞。線性PEI轉染試劑廣適用于常見細胞系，如HEK-293、HEK293T、HepG2、Hela、CHO-K1、COS-1、COS-7、NIH/3T3和Sf9等。該試劑即使在有血清存在的情況下，它仍然能的將核酸導入細胞。78bio公司提供的線性PEI轉染試劑具有如下優(yōu)點：優(yōu)越的轉染效率,重組蛋白的高表達水平,與含血清的培養(yǎng)基相兼容,低細胞毒性,易于操作?質量控制每批次線性PEI轉染試劑均經(jīng)過轉染測試。將eGFP表達質粒（GeneCopoeiaCat.No.EX-EGFP-Lv01）用EndoFectinTM-Plus轉染試劑轉入亞融合狀態(tài)的HEK-293細胞，轉染16h后，超過95%的細胞表達eGFP。PEI轉染試劑使用注意事項