什么樣本可以做二代測序?②
組織樣本
新鮮組織:如手術切除的**組織、活檢組織等。新鮮組織樣本中的細胞完整性較好,能夠提供高質(zhì)量的DNA和RNA。在**研究中,對新鮮**組織進行全基因組測序、轉(zhuǎn)錄組測序等,可以深入了解**的基因突變、基因表達變化等情況。例如,在研究結直腸*的發(fā)病機制時,對手術切除的結直腸*組織及其*旁組織進行測序,比較兩者之間的差異,以發(fā)現(xiàn)**相關的基因變異和表達調(diào)控異常。
福爾馬林固定石蠟包埋(FFPE)組織:這是臨床上常用的保存組織樣本的方式。FFPE組織中的DNA和RNA會有一定程度的損傷和降解,但經(jīng)過適當?shù)奶崛『托迯吞幚砗?,仍然可以用于二代測序。在回顧性研究中,大量的FFPE組織存檔樣本可以被利用起來。例如,對多年前保存的乳腺*FFPE組織進行測序,研究乳腺*的疾病進展和***反應相關的基因變化。 二代測序的原理是什么?徐匯區(qū)哪里有二代測序流程
什么樣本可以做二代測序?④
4、口腔樣本
口腔拭子:通過刮取口腔黏膜細胞來獲取樣本??谇皇米硬杉奖?、無創(chuàng),可用于DNA提取和基因檢測。例如,在法醫(yī)鑒定中,口腔拭子是常用的樣本來源,用于個體身份識別和親子關系鑒定等;在一些大規(guī)模的人群基因篩查項目中,也可以使用口腔拭子來收集樣本。
5、糞便樣本
糞便中含有腸道微生物、腸道上皮細胞等成分。對糞便樣本進行宏基因組測序,可以研究腸道微生物群落的組成、功能和多樣性。例如,在腸道疾?。ㄈ缪装Y性腸病、結直腸*等)的研究中,分析糞便中微生物群落結構的變化,以及微生物基因的表達情況,有助于了解疾病的發(fā)病機制和尋找潛在的生物標志物。 山東二代測序技術一代和二代測序的區(qū)別?
二代測序的建庫步驟④
四、接頭連接
接頭選擇:根據(jù)測序平臺的要求選擇合適的接頭。不同的二代測序平臺(如Illumina、IonTorrent等)有各自特定設計的接頭。這些接頭包含與測序平臺的流動池(flowcell)表面互補的序列,用于將DNA片段固定在測序芯片上,還包含用于區(qū)分不同樣本的索引序列(index)等。
連接反應:使用DNA連接酶將接頭與DNA片段連接。T4DNA連接酶是常用的連接酶,它可以在ATP(三磷酸腺苷)存在下,將接頭的5'-磷酸基團與DNA片段的3'-羥基形成磷酸二酯鍵,從而將接頭連接到DNA片段的兩端。連接反應的條件(如溫度、連接酶的用量、反應時間等)需要根據(jù)具體的實驗要求進行優(yōu)化,以確保較高的連接效率。
二代測序——數(shù)據(jù)分析類問題
二代測序數(shù)據(jù)分析的主要內(nèi)容和挑戰(zhàn)是什么:主要內(nèi)容包括數(shù)據(jù)的質(zhì)量控制、序列比對、變異檢測、基因表達定量、功能注釋等。挑戰(zhàn)在于數(shù)據(jù)量巨大,需要高效的計算資源和復雜的生物信息學算法來處理;數(shù)據(jù)質(zhì)量參差不齊,需要嚴格的質(zhì)量控制和過濾;變異解讀復雜,需要結合生物學知識和數(shù)據(jù)庫進行準確的評估。如何從海量的二代測序數(shù)據(jù)中篩選出有意義的信息:通過設定合理的質(zhì)量控制標準過濾低質(zhì)量數(shù)據(jù),然后根據(jù)研究目的進行針對性的分析,如在疾病研究中,重點關注與疾病相關的基因區(qū)域的變異和表達變化;利用已知的生物學數(shù)據(jù)庫和功能注釋信息對檢測到的變異和基因進行注釋和篩選,優(yōu)先關注那些對蛋白質(zhì)功能、基因調(diào)控等有***影響的變異和差異表達基因。 二代測序是一種能夠同時對數(shù)百萬甚至數(shù)十個億DNA片段進行測序的方法。
二代測序的操作流程有哪些?
1.DNA提取與質(zhì)檢
· 純凈、足量、質(zhì)量好的樣本DNA是檢測成功的基礎(可以來源于血漿、新鮮組織等)
2.DNA處理→文庫構建
· 得到統(tǒng)一長度區(qū)間+有接頭的DNA片段
· 步驟:DNA打斷→末端修復→片段篩選→加A尾→接頭連接→PCR
3.靶向捕獲
· 特定區(qū)域基因的定向檢測
4.上機測序
· 根據(jù)通量情況選擇測序儀
· 上樣后機器完成
5.數(shù)據(jù)分析
· 初級分析:光強數(shù)據(jù)(不同熒光標記堿基)→序列信息(AGCT)
· 二級分析 多儀器自帶
· 三級分析 vcf文件 可diy 二代測序使用的是哪種設備?安徽二代測序原理
二代測序常用于醫(yī)學篩查或診斷。徐匯區(qū)哪里有二代測序流程
什么樣本可以做二代測序?③
細胞樣本
培養(yǎng)細胞:包括各種原代培養(yǎng)細胞和細胞系。在基礎醫(yī)學研究中,對培養(yǎng)的細胞進行測序可以了解細胞的基因特征和功能變化。例如,在研究細胞信號轉(zhuǎn)導通路時,對經(jīng)過特定刺激處理的培養(yǎng)細胞進行轉(zhuǎn)錄組測序,以分析基因表達的上調(diào)或下調(diào)情況。
脫落細胞:如痰液中的脫落細胞、尿液中的脫落細胞等。這些細胞可以用于某些疾病的篩查。例如,在肺*篩查中,對痰液中的脫落細胞進行基因檢測,通過二代測序?qū)ふ曳?相關的基因突變,作為一種非侵入性的檢測方法。 徐匯區(qū)哪里有二代測序流程
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