二代測序的操作流程有哪些?
1.DNA提取與質檢
· 純凈、足量、質量好的樣本DNA是檢測成功的基礎(可以來源于血漿、新鮮組織等)
2.DNA處理→文庫構建
· 得到統(tǒng)一長度區(qū)間+有接頭的DNA片段
· 步驟:DNA打斷→末端修復→片段篩選→加A尾→接頭連接→PCR
3.靶向捕獲
· 特定區(qū)域基因的定向檢測
4.上機測序
· 根據(jù)通量情況選擇測序儀
· 上樣后機器完成
5.數(shù)據(jù)分析
· 初級分析:光強數(shù)據(jù)(不同熒光標記堿基)→序列信息(AGCT)
· 二級分析 多儀器自帶
· 三級分析 vcf文件 可diy 二代測序又可以稱之為什么?重慶哪里有二代測序技術
二代測序——基因組測序該測幾個G?③
基因組測序所需的測序量通常用數(shù)據(jù)量來衡量,一般以 G 為單位,不同的測序目的和基因組類型所需要的測序量有所不同。
微生物基因組測序細菌基因組:
細菌基因組
相對較小,一般在1M-10M之間,測序深度通常在50X-100X左右,數(shù)據(jù)量在0.05G-1G左右即可滿足基本的基因組組裝和變異檢測需求。
***基因組:***基因組大小差異較大,從幾M到上百M都有。對于較小的***基因組,測序深度在30X-50X左右,數(shù)據(jù)量在0.1G-5G之間;而對于較大的***基因組,可能需要適當降低測序深度至10X-20X,數(shù)據(jù)量在1G-20G左右。 福建嘉安健達二代測序應用二代測序使用的是哪種設備?
二代測序技術的一些***研究進展②
植物基因組學研究領域 :
花生四倍體野生種基因組測序:河南農業(yè)大學殷冬梅教授團隊和上海交通大學韋朝春教授團隊聯(lián)合發(fā)布了花生四倍體野生種近乎完整基因組 amon2.0 版本。該研究結合 ONT 超長讀段、二代測序和 Hi-C 等多種測序技術,使基因組的連續(xù)性、完整性和準確性都得到了顯著提高,為花生的遺傳馴化和分子育種提供了重要的基因組數(shù)據(jù)信息資源。
長雄野生稻基因組解析:中科院昆明動物所王文研究組與云南省農科院糧食作物研究所胡鳳益研究組等中外機構合作,利用二代測序技術成功組裝出高質量的長雄野生稻基因組,并對其與近緣物種的分歧時間、基因的收縮擴張等進行了分析,還鑒定出一批可能影響地下莖以及自交不親和性狀的候選基因及代謝途徑,為解析相關分子機制提供了重要線索。
一代、二代、三代測序的區(qū)別分別是什么?
一代測序是上世紀70年代由Sanger和Coulson開創(chuàng)的DNA雙脫氧鏈終止法測序,也稱為Sanger測序。
二代測序技術(NGS)是為了改進一代測序通量過低的問題而出現(xiàn)的,能夠同時對上百萬甚至數(shù)十億個DNA分子進行測序實現(xiàn)了大規(guī)模、高通量測序的目標。
三代測序主要有兩種技術PacBio公司的SMRT和Oxford Nanopore 的納米孔單分子測序技術,這兩種技術的測序讀長都可以達到幾-kb的級別,遠遠高于二代測序技術。 宏基因組測序也是二代測序。
二代測序——轉錄組測序的應用領域
1、基礎生物學研究:可以用于研究生物的發(fā)育過程。例如,在胚胎發(fā)育過程中,通過轉錄組測序可以了解不同階段胚胎細胞中基因的表達變化,揭示胚胎發(fā)育的分子機制。還可以用于物種進化研究,比較不同物種間轉錄組的差異,推斷基因表達的進化模式。
2、醫(yī)學研究和臨床診斷:在疾病研究方面,用于尋找疾病相關的生物標志物。例如,在**研究中,通過對比**組織和正常組織的轉錄組,可以發(fā)現(xiàn)一些在**中特異性高表達或低表達的基因,這些基因有望成為**診斷、預后判斷的標志物。同時,也可以用于藥物研發(fā),通過轉錄組測序了解藥物作用后細胞基因表達的變化,評估藥物療效和毒性。
3、農業(yè)和植物學研究:在作物育種中,可以研究不同品種作物在抗逆性(如抗旱、抗寒、抗病)等方面的基因表達差異,為培育優(yōu)良品種提供理論依據(jù)。在植物生長發(fā)育研究中,分析植物在不同生長環(huán)境和生長階段的轉錄組變化,了解植物***等因素對植物生長的調控機制。 二代測序通量大,可以產生上G的reads.海南二代測序
二代測序廣泛應用于醫(yī)學研發(fā)。重慶哪里有二代測序技術
二代測序—全外顯子測序的局限性
不能檢測所有的遺傳變異:它只能檢測外顯子區(qū)域的變異,對于非外顯子區(qū)域(如內含子、基因間區(qū)域)的變異無法檢測,而這些區(qū)域的某些變異也可能對基因的表達和功能產生重要影響,如內含子中的突變可能影響基因的剪接。
數(shù)據(jù)分析復雜:全外顯子測序會產生大量的數(shù)據(jù),需要復雜的生物信息學工具和方法來進行數(shù)據(jù)分析。包括數(shù)據(jù)的質量控制、變異的檢測和注釋、致病性的評估等多個環(huán)節(jié),其中任何一個環(huán)節(jié)出現(xiàn)問題都可能導致錯誤的結論。 重慶哪里有二代測序技術